ANÁLISE COMPREENSIVA DE MARCADORES STR NO CROMOSSOMO X HUMANO: APLICAÇÕES NA GENÉTICA MÉDICA E FORENSE

Os microsatélites, denominados seqüências curtas repetidas em tandem STR (Short Tandem Repeats), exibem considerável variação em seqüência e número de cópias entre os indivíduos. Em humanos, eles perfazem quase 4% do genoma e constituem uma das principais fontes de marcadores genéticos polimórficos utilizados em Genética Médica e Forense. Os critérios atuais de escolha de marcadores são centrados em motivos históricos. Até o presente nenhuma análise rigorosa havia sido feita para microsatélites localizados no cromossomo X humano.
Esta dissertação é apresentada em dois capítulos. No capitulo I procuramos responder as seguintes questões baseados na informatividade dos microsatélites conhecidos: O que é um bom marcador? Um bom marcador poderia ser predito por uma análise in silico? Por meio de uma análise comparativa e compreensiva para microsatélites em três seqüências referência para o cromossomo X humano foram identificados e validados in silico 94 marcadores pentanucleotídeos, que serão úteis no diagnóstico genético de aneuploidias, caracterização dos cromossomos sexuais e investigação de parentesco. Na região Xq28, associada com hemofilia A, a análise foi de alta resolução, obtendo-se um repertório 5,8 vezes maior do que o número de elementos STR di-, tri- e tetranucleotídeos conhecidos, o que facilitará o diagnóstico indireto da doença. Esses achados foram utilizados para gerar mapas físicos e genéticos, úteis em estudos de análise de ligação. No capítulo II relatamos a genotipagem, utilizando STR estabelecidos no diagnóstico genético, de indivíduos com suspeita constituição alossômica e de dois casos raros; um indivíduo com as
síndromes de Down e Klinefelter combinadas e um indivíduo de provável origem por diploidização de um embrião triplóide. A tipagem foi inequívoca no estabelecimento do sexo genético e dosagem dos marcadores. Concluímos que a informatividade de um marcador STR pode ser predita pela análise in silico e que os critérios de escolha de um bom marcador dependerão da finalidade, se na Genética Médica ou Forense. Os STR dinucleotídeos amplamente utilizados em citogenética molecular, e que apresentam perfis eletroforéticos de difícil interpretação, devem ser substituídos por STR pentanucleotídeos e tetranucleotídeos. A estratégia de mineração e validação de marcadores polimórficos informativos descritos também será adequada para a definição de critérios de predição de novos marcadores tanto para autossomos quanto para o cromossomo Y.

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